обьявления

Разделы по темам

Какая коронка лучше на передние зубы
Круги отрезные, алмазные коронки
medstom27.ru
beautylilistudio
Адреса магазинов и отзывы покупателей о магазинах косметики
beautylilistudio.ru

Антиадгезивная активность зубных

 

Антиадгезивная активность зубных паст

Полученные в процессе клинических исследований зубной пасты R.O.C.S. данные о значительном улучшении гигиенического состоянии полости рта, отмеченная и исследователями и испытуемыми задержка скорости отложения зубного налета [1, 2] побудили нас к проведению дополнительных исследований влияния протеолитического фермента бромелаина (одного из ключевых компонентов запатентованного состава) на антиадгезивные свойства зубной пасты R.O.C.S.
Антиадгезивная активность зубных паст
Установление взаимодействия между патогенном
и клеткой-мишенью в результате бактериальной адгезии является определяющим звеном в ходе инфекционного про­цесса. Прикрепление и последующее размножение микроорга­низмов с образованием микроколоний и/или пленки обеспечи­вает им более выгодные условия существования, связанные, в частности, с противодействием механическому удалению бак­терий из макроорганизма. Доказано, что адгезивность болезне­творных микроорганизмов часто коррелирует с их патогенностью и вирулентностью. Так, на авирулентном штамме Escherichia coli, было продемонстрировано, что перенесенная плазмида, контролирующая синтез антигена К88, усиливает не только адгезию микроорганизмов к щеточной каемке энтероцитов, но и вирулентность экспериментально изменен­ного штамма [3, 4, 5]. Адгезия E.Coli к уроэпителию приводит не только к механическому закреплению микроорганизма в новой экологической нише, но и вызывает адекватную новым условиям перестройку метаболизма. Кроме перестройки метаболизма, механический контакт и связывание Р-ворсинок с клеткой эпителия ведут к изменению механизма сборки новых ворсинок (они становятся короче) и являются сигналом к экспрессии ряда генов вирулентности E.coli (комплекса рар и гемолизина) [6].
Антиадгезивная активность зубных паст
Молекулярный механизм бактериальной адгезии является
универсальным для патогенных и комменсальных форм, что подтверждено на примере микрофлоры верхних дыхательных путей, нижних отделов пищеварительного и мочеполового трактов [7]. Основой взаимодействия любых биоло­гических систем и межклеточных коммуникаций служит лиганд-рецепторное узнавание [8, 9], при котором меньший по размерам и молекулярной массе участник называют лигандом (например, поверхностные структуры клеточной стенки бактерий), а его более крупный комплементарный партнер — рецептором (например, сайты свя­зывания на цитолемме эукариотической клетки).
Лиганды и рецепторы представляют собой полимеры гликолипидной или гликопротеинной природы, состоящие из множе­ственных копий уникальных в каждом случае субъединиц и определяющие тропизм различных патогенов к своим клеткам-мишеням [10]. Именно последнее обстоятельство способствует колонизации бакте­риями тканей макроорганизма с повышенной плотностью ре­цепторов [9]. In vivo на процесс адгезии существенное влияние оказывают растворенные компоненты биологических жидкостей и секретов, с которыми патогены чаще встречаются до контактов с клетками-мишенями и кото­рые по химическому строению аналогичны клеточным рецепто­рам. Orksov a. Birch-Anderson (1980) [11] продемонстрировали, что Е. coli адгезируют к муцину слюны раньше, чем к эпителию ротовой полости. Способностью адсорбировать белковые компоненты слюны обладают стрептококки полости рта (Streptococcus sanguis, S. Mitis, S. Salivarius), причем в исследовании было показано, что нарушить эту адгезию возможно с помощью протеолитического фермента трипсина [12].
Антиадгезивная активность зубных паст
Показатели адгезии как многофакторного процесса зависят
от большого числа условий, как со стороны бактерий, так и макроорганизма. Известно, что видовая принадлежность в значительной степени характеризует адгезивные свойства бактерий. Так, Streptococcus mutans практически не фикси­руется на эпителиоцитах языка и щек, но необратимо прикреп­ляется к поверхности зубов [13]. Arbuth­nott a. Smith (1979)[5] отмечают, что адгезивность St. pyogenes к эпителиальным клеткам ротовой полости в 6 раз выше, чем у Е. coli. Для це­лого ряда микроорганизмов показана прямая связь степени гидрофобности клеточной поверхности и адгезивности. Так, St. aureus из гнойных очагов более гидрофобен, чем из окру­жающей среды, полости носа, поверхности кожи [4].
К факторам, влияющим на адгезивные свойства тканей и клеток хозяина, относится индивидуальное состояние пациен­та: высокая степень колонизации эпителиоцитов ротовой по­лости Str. pyogenes у больных различными воспалительными заболеваниями, снижение этого показателя у носителей и прак­тически полное отсутствие у здоровых людей [4]. Существует разница в прикреплении микроорганизмов к раз­ным участкам в пределах одного макроорганизма. Для Str. salivarus и St. aureus нижняя поверхность языка рассматри­вается как богатая рецепторами зона и наиболее благоприятная для инвазии область [13]. На вариабельность рецепторного аппарата эпителиоцитов может оказывать влияние и гетерогенность клеточной популяции, обусловленная физиологическими изменениями поверхностных структур клеток при дифференциации или старении. Патологические изменения тканей макроорганизма создают дополнительные условия, способствующие адгезии микроорганизмов [14].
Антиадгезивная активность зубных паст
Изучение молекулярной природы лиганд-рецепторных комп
лексов, образующихся при взаимодействии различных бактерий с соответствующими им клетками-мишенями, а также факторов, влияющих на процесс адгезии in vivo и in vitro, позволяет разработать профилактические меры, направленные на подав­ление ранних этапов инфекционного процесса.
В основе поисков антиадгезивных препаратов лежит созда­ние эффективных препятствий с разнообразными механизмами действия при установлении взаимодействия между лигандами и рецепторами. Одним из наиболее известных механизмов, с учетом которого осуществляется подбор ингибиторов процесса адгезии, является введение в систему бактерии – эукариотические клетки растворимых веществ, конкурирующих с лигандами или рецепторами за места связывания на клеточных поверхностях [9]. При этом все растворимые соединения можно разделить на две группы, способные реагировать либо с бактериальными, либо с эукариотическими клетками. Изби­рательное связывание лигандов микроорганизмов предпочти­тельнее, так как в меньшей степени влияет на рецепторный аппарат клеток-мишеней, а через него на самые разнообразные процессы в тканях макроорганизма [15].

К настоящему времени известны многочисленные экспери­ментальные доказательства того, что применение природных или синтетических аналогов клеточных рецепторов и компонентов тканевых жидкостей способно значительно снизить, а в отдельных случаях и полностью предотвратить прикрепление микроорганизмов к клеткам хозяина [9, 15, 16]. Установлены факты взаимодействия бактериальных лигандов с белками, гликопротеинами плазмы крови (иммуноглобулинами классов А и G, р2-микроглобулином, фибриногеном, фибронектином, альбуми­ном, трансферрином, а также некоторыми другими [4, 16, 17], мочи (ТН-белком) [18,19], слюны (муцином, агглютининами) [20], что позволило использовать большинство из перечисленных выше соединений в экспериментальных и клинических условиях в качестве ингибиторов бактериальной адгезии. Сегодня имеются данные об антиадгезивном действии экзогенных протеолитических ферментов. Действие ферментов не ограничивается изменением характера прилипания бактерий к мишени, но и приводит к нарушению уже сформированных колоний. Разные ферменты демонстрируют различный уровень эффективности.

Антиадгезивная активность зубных паст

Результаты аналитических исследований указывают на специфичность такого влияния. [21]
Задачей настоящего исследования было оценить влияние зубной пасты, содержащей бромелаин на адгезию микроорганизмов, обитающих в полости рта человека.

 

Материалы и методы.
Материалы:
Исследована зубная паста R.О.С.S. включающая бромелаин.
Контролем служила зубная паста аналогичной рецептуры без бромелаина.
Исследование проводилось слепым методом. Тестируемые образцы были обозначены условными номерами 56 (R.O.C.S.) и 57 (контроль).
Тест-культуры микроорганизмов:
Клинические штаммы микроорганизмов, выделенные из ротовой полости волонтеров: Staphylococcus aureus 20, Streptococcus salivarius 67, Streptococcus sangius 12, Streptococcus sobrinius 83.
Культура клеток: кожно-мышечных фибробластов эмбриона человека.
Оборудование: бактериологические анализаторы – IEMS-фотометр фирмы LabSystems (Финляндия), BBL Crystal фирмы Becton Dickenson (США); система ввода изображений «Видео-ТЕСТ-морфология» (Германия).
Методы.
Микробиологические, морфологические.
Все исследования проводили в 3-х повторениях.
1-ый этап.
Путем прямого посева тампоном из полости рта у 10 волонтеров на 5% кровяной агар получены чистые культуры микроорганизмов Staphylococcus aureus 20, Streptococcus salivarius 67, Streptococcus sangius 12, Streptococcus sobrinius 83.
Полученные штаммы были идентифицированы на вышеперечисленных бактериологических анализаторах.
2-ой этап.
Изучена антиадгезивная активность тестируемых паст на культуре клеток (КК) кожно-мышечных фибробластов эмбриона человека. Фибробласты выращивали в пробирках Лейтона на покровных стеклах в ростовой питательной среде Игла 24 часа при 37 град. С до образования конфлюэнтного монослоя по методике Грабовской К.Б., Тотолян А.А., 1977 [22].
Затем ростовую среду сливали и добавляли по 1,8 мл тестируемых образцов паст и по 0,2 мл суточной культуры соответствующего тест-штамма в дозе 10 в восьмой степени  КОЕ/мл и инкубировали 2 часа при 37 градю. С.
После инкубации клетки монослоя отмывают от неприкрепившихся бактерий многократной сменой среды Игла, фиксируют 96 этиловым спиртом, окрашивают по Романовскому-Гимза и исследуют микроскопически.
Опыты по оценке подавления адгезии тест-штаммов тестируемыми пастами проводили с разведением каждой пасты 1:20000 в присутствии 50% сыворотки человека.
Интенсивность процесса адгезии тест-штамма оценивали по следующим показателям: 1) индекс адгезии (ИА) выражают средним числом бактериальных клеток на одной эукариотической клетке; 2) процент пораженных клеток монослоя (ПК%); 3) обсемененность 100 клеток монослоя – микробную нагрузку (МН) – определяют по формуле МН= ИА х ПК%.
Степень адгезии микроба определяют по показателю микробной нагрузки относительно контроля, принимаемого за 100%.
В опыте использовали 2 экспозиции – 2 часа и 3 минуты с концентрацией 1:20000, практически не вызывающей повреждения монослоя клеток. (рис. 1, 2, 3, 4).
Как видно из таблицы 1, препараты 56 и 57 недостаточно интенсивно подавляли адгезию тест-микроорганизмов при экспозиции 2 часа - % подавления адгезии составил соответственно в отношении:
- S.aureus – 28% и 16%;
- Str.salivarius – 30% и 17%;
- Str.sangius – 26% и 13%;
- Str.sobrinius – 31% и 17%.

Как видно из таблицы 2, при сокращении времени экспозиции до 3 минут эффективность препаратов 56 и 57 резко повышалась - % подавления адгезии составил соответственно в отношении:
- S.aureus – 80% и 70%;
- Str.salivarius – 80% и 70%;
- Str.sangius – 83% и 72%;
- Str.sobrinius – 79% и 67%.
Во всех случаях препарат 56 (R.O.C.S. с бромелаином) был более эффективен, чем препарат 57.
Заключение
Эффективность препаратов для подавления адгезии нормальной микробиоты ротовой полости зависит от экспозиции: при 2-часовой экспозиции эффективность зубных паст невысокая, а при времени выдержки 3 минуты – она резко возрастает – до 70-80% подавления адгезии штаммов микроорганизмов. При этом 3 минуты – обычное время для чистки зубов. Это, по-видимому, связано с обратимостью адгезии в короткие сроки после внесения штаммов в модельную систему, т.к. обычно через 1-2 часа адгезия становится необратимой.
Полученные результаты свидетельствуют о перспективности разработки данных рецептур, особенно препарата 56 (зубная паста R.O.C.S. с бромелаином), как средств для профилактики формирования микробной биопленки в полости рта.

Таблица 1. Адгезивная активность тест-штаммов в присутствии тестируемых паст 56 («РОКС») и 57 (контроль) при экспозиции 2 часа
Антиадгезивная активность зубных паст
Таблица 2. Адгезивная активность тест-штаммов в присутствии тестируемых паст 56 (R.O.C.S) и 57 (контроль) при экспозиции 3 минуты
Антиадгезивная активность зубных паст

Антиадгезивная активность зубных паст
Рис. 1. Контроль клеток

 

Антиадгезивная активность зубных паст
Рис. 2. Клетки + Str. Salivarius 67

 

Антиадгезивная активность зубных паст
Рис. 3. Культура клеток + Str. Salivarius 67 + з.п. 56 (1:20000) экспозиция 2 часа

Антиадгезивная активность зубных паст
Рис. 4. Культура клеток + Str. Salivarius 67 + з.п. 56 (1:20000) экспозиция 3 минуты

Г.Е. Афиногенов д.м.н., профессор, А.Г. Афиногенова к.ф.н, Е.Н. Доровская
ФГУ «РНИИТО им.Р.Р. Вредена Росздрава», Санкт-Петербург,
А.В. Гроссер, ООО WDS, Москва   

Комментариев к статье нет..
[ Добавить ] комментарий
Поля с пометкой * обязательны для заполнения

*Ваше имя
  Ваш сайт  
  Ваш город
*Ваше сообщение

Код подтверждения
*Код с картинки   @
код на картинке содержит только цифры (0..9) и буквы англ. алфавита (A..Z)